关于实时荧光定量PCR引物的设计原则正确的四( )。
A.
在实时荧光PCR中,单链引物最适长度15-20bp, GC含量在20%-80%(45%-55%最佳)
B.
TaqMan 引物的Tm值最好68-70℃,分子信标和杂交探针相关引物的Tm值变化区间可大一些,但对于同一对引物而言,其Tm值应接近,差异不要超过2℃。
C.
为了尽量减少在PCR反应过程中的非特异性扩增,引物的3'端最好不为G和(或)C。
D.
引物设计的基本原则,短的扩增片段有利于PCR反应获得较高的扩增效率。
E.
SYBR GreenI技术通常要求扩增片段不大于300bp,TaqMan探针技术要求扩增片段应在50-150bp, 不能超过400bp.