使用二种酶同时进行DNA切断反应 (Double Digestion) 时,为了节省反应时间,通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa采用通用buffer表示系统,并对每种酶表示了在各通用buffer中的相对活性。尽管如此,在进行Double Digestion时,有时还会难以找到合适的通用buffer。 本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心,显示了在Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中,各通用buffer之前表示的 [数字×] 是指各通用buffer的反应体系中的最终浓度。TaKaRa销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍,1×时稀释至10倍,2×时稀释至5倍进行使用。 注意 1 μg DNA中添加10 U的限制酶,在50 μl的反应体系中,37°C下反应1小时可以完全降解DNA。 为防止Star活性的产生,请将反应体系中的甘油含量,尽量控制在10%以下。 根据DNA的种类,各DNA的立体结构的差别,或当限制酶识别位点邻接时,有时会发生Double Digestion不能顺利进行的可能。 现有10 μL pUC质粒,浓度为0.5 μg/ μL ,请设计一个利用BamHI和NcoI双酶切该质粒的实验。已知BamHI浓度为50U/μL, 保存在50%的甘油中,含有10×K buffer;NcoI浓度为50U/μL, 保存在50%的甘油中,含有10×K buffer和100×BSA。请写出50 μl双酶切的反应体系。