你在研究一个癌基因,其编码一个转录因子,在细菌中表达时,基因产生的蛋白完全不可溶,无法直接检验其功能,尽管你可以获得该蛋白的很好抗体。免疫染色显示,该蛋白定位于核内。如果能判定它结合什么样的DNA序列,就能通过在有基因启动子天然位点的现存序列库中找到它调控的基因。 你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38,①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链,两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A));②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中,转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上;③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链;④PCR扩增出该核苷酸链,并分析其顺序。 你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验,用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中,四轮选择和扩增后,用BamHI和EcoRI处理分离的DNA,把片段克隆到质粒上,并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。